用37℃培養箱制備感受態

      今天喆圖小編來說說在實驗中，為了獲得純的重組質粒DNA，需要允許外源DNA分子進入的細胞。經過一些特殊方法處理后，細胞膜的通透性發生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的細胞，即感受態細胞。

     那么感受態如何制備，喆圖小編就來給大家說一說它的基本制備步驟：

    ①、從37℃培養箱中培養16-20 h的平板中挑取一個單菌落(直徑2-3 mm)，轉到一個含有100 ml LB或SOB培養基的1L燒瓶中。于37℃劇烈振搖培養3 h。一般經驗，1 OD600約含有大腸桿菌DH5α 109 個/mL。

    ②、將細菌轉移到一個無菌、一次性使用的、用冰預冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培養物冷卻至0℃。

    ③、于4℃用Sorvall GS3特頭以4 100 r/min離心10 min，以回收細胞。

    ④、倒出培養液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養液流盡。

    ⑤、每50 ml初始培養液用30 ml預冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重懸每份細胞沉淀。

    ⑥、于4℃用Sorvall GS3轉頭以41 00 r/min離心10 min，以回收細胞。

    ⑦、倒出培養液，將管倒置1 min以使MAX后的痕量培養液流盡。

    ⑧、每50 ml初始培養物用2 ml用冰預冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重懸每份細胞沉淀。

    ⑨、此時可以用新鮮制備的感受態細胞直接做轉化實驗，也可以將細胞凍存于- 40℃的低溫保存箱中。

    以上內容僅供參考如需了解詳情請聯系喆圖客服。