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    上海喆圖科學儀器

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    細菌突變試驗

    更新時間:2019-04-11點擊次數:1620

          電熱恒溫培養箱恒溫水浴鍋振蕩水浴搖床、壓力蒸汽消毒器、干熱烤箱、低溫冰箱(-80℃)或液氮生物容器、普通冰箱、天平(精密度0.1g和0.0001g)、混勻振蕩器、勻漿器、菌落計數器、低溫高速離心機,玻璃器皿、生物安全柜等。

          培養基和試劑

          0.5mmol/L組氨酸-0.5mmol/L色氨酸-0.5mmol/L生物素溶液

    成分:

    L-組氨酸(MW155)

    78mg

     

    D-生物素(MW244)

    122mg

     

    L-色氨酸(MW204)

    102mg

     

    加蒸餾水/去離子水至

    1000mL

           配制:將上述成分加熱,以溶解生物素,然后在0.068MPa下高壓滅菌20min。貯于4℃冰箱。若試驗中不使用大腸桿菌,則不添加色氨酸。

            頂層瓊脂培養基

    成分:

    瓊脂粉

    1.2g

     

    氯化鈉

    1.0g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    200mL

            配制:上述成分混合后,于0.103MPa下高壓滅菌30min。實驗時,加入0.5mmol/L組氨酸-0.5mmol/L色氨酸-0.5mmol/L生物素溶液20mL。若試驗中不使用大腸桿菌,則不添加色氨酸。

             Vogel-Bonner(V-B)培養基E

    成分:

    枸櫞酸(C6H8O7·H2O)

    100g

     

    磷酸氫二鉀(K2HPO4)

    500g

     

    磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4·4H2O)

    175g

     

    硫酸鎂(MgSO4·7H2O)

    10g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    1000mL

          配制:先將前三種成分加熱溶解后,再將溶解的硫酸鎂緩緩倒入容量瓶中,加蒸餾水/去離子水至1000mL。于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。

           20%葡萄糖溶液

    成分:

    葡萄糖

    200g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    1000mL

          配制:加少量蒸餾水/去離子水加溫溶解葡萄糖,再加蒸餾水/去離子水至1000mL。于0.068MPa下高壓滅菌20min。儲于4℃冰箱。

          底層瓊脂培養基

    成分:

    瓊脂粉

    7.5g

     

    蒸餾水/去離子水

    480mL

     

    V-B培養基E

    10mL

     

    20%葡萄糖溶液

    10mL

           配制:首先將前兩種成分于0.103MPa下高壓滅菌30min后,再加入后兩種成分,充分混勻倒底層平板。按每皿25mL制備平板,冷凝固化后倒置于電熱恒溫培養箱中24h,備用。

          營養肉湯培養基

    成分:

    :C8H9Cl

    2.5g

     

    胰胨

    5.0g

     

    磷酸氫二鉀(K2HPO4)

    1.0g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    500mL

          配制:將上述成分混合后,于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。

          鹽溶液(1.65mol/L KCl+0.4mol/L MgCl2)

    成分:

    (KCl)

    61.5g

    KCl

    氯化鎂(MgCl2·6H2O)

    40.7g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    500mL

          配制:在水中溶解上述成分后,于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。

          0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)

    成分:

    磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)

    2.965g

     

    磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)

    29.015g

     

    加蒸餾水/去離子水至

    500mL

          配制:溶解上述成分后,于0.103MPa下高壓滅菌30min。儲于4℃冰箱。

          S9混合液

    成分:

    每毫升S9混合液

     

    肝S9

    100μl

     

    鹽溶液

    20μl

     

    滅菌蒸餾水/去離子水

    380μl

     

    0.2mol/L磷酸鹽緩沖液

    500μl

     

    輔酶II(NADP)

    4μmol

     

    6-磷酸葡萄糖(G-6-P)

    5μmol

           配制:將輔酶II和6-磷酸葡萄糖置于滅菌三角瓶內稱重,然后按上述相反的次序加入各種成分,使肝S9加到已有緩沖液的溶液中。該混合液必須臨用現配,并保存于冰水浴中。實驗結束,剩余S9混合液應該丟棄。

           菌株鑒定用和特殊用途試劑

           組氨酸-色氨酸-生物素平板

    成分:

    瓊脂粉

    15g

     

    蒸餾水/去離子水

    934mL

     

    (V-B)培養基E

    20mL

     

    20%葡萄糖

    20mL

     

    滅菌鹽酸組氨酸水溶液(0.5g/100mL)

    10mL

     

    滅菌鹽酸色氨酸水溶液(0.5g/100mL)

    10mL

     

    滅菌0.5mmol/L生物素溶液

    6mL

           配制:高壓滅菌瓊脂和水后,將滅菌20%葡萄糖,V-B培養基、組氨酸溶液,加進熱的瓊脂溶液中(若試驗中不使用大腸桿菌,則不添加色氨酸,同時蒸餾水/去離子水改為944mL)。待溶液稍微冷卻后,加入滅菌生物素,混勻,澆制平板。

           氨芐青霉素平板和氨芐青霉素/四環素平板

    成分:

    瓊脂粉

    15g

     

    蒸餾水/去離子水

    930mL

     

    (V-B)鹽溶液

    20mL

     

    20%葡萄糖

    20mL

     

    滅菌鹽酸組氨酸溶液(0.5g/100mL)

    10mL

     

    滅菌鹽酸色氨酸水溶液(0.5g/100mL)

    10mL

     

    滅菌0.5mmol/L生物素溶液

    6mL

     

    氨芐青霉素溶液(8mg/mL于0.02mol/L NaOH中)

    3.15mL

     

    四環素溶液(8mg/mL于0.02mol/L HCl中)

    0.25mL

             配制:瓊脂和水高壓滅菌20min,將無菌的葡萄糖、VB鹽溶液、組氨酸溶液和色氨酸溶液,加進熱的瓊脂溶液中,混勻(若試驗中不使用大腸桿菌,則不添加色氨酸,同時蒸餾水/去離子水改為加940mL)。冷卻至大約50℃,無菌條件下加入四環素溶液和/或氨芐青霉素溶液。

             應該在傾注瓊脂平板后幾天內,制備主平板。

             營養瓊脂平板

    成分:

    瓊脂粉

    7.5g

     

    營養肉湯培養基

    500mL

            配制:于0.103MPa下高壓滅菌30min后傾注平板。

          試驗菌株及其生物學特性鑒定

          試驗菌株

    采用以下菌株作為標準組合:

    鼠傷寒沙門氏菌TA1535;

    鼠傷寒沙門氏菌TA97或TA97a或TA1537;

    鼠傷寒沙門氏菌TA98;

    鼠傷寒沙門氏菌TA100;

    鼠傷寒沙門氏菌TA102或大腸桿菌WP2uvrA或大腸桿菌WP2uvrA(pKM101);

          生物學特性鑒定

    新獲得的或長期保存的菌種,在試驗前必須進行菌株的生物特性鑒定。

    以上內容僅供參考!

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