常規培養基的制備、滅菌與消毒

一、實驗目的

      清楚培養基的配制原理，了解配制培養基的常用方法和步驟，認識常見滅菌、清毒基本原理及方法，掌握過濾除菌、高壓蒸汽滅菌及干熱滅菌的操作方法。
二、實驗原理

       培養基是人工按比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養物質的混合物。培養基的原材料可分為水、無機鹽、氮源、碳源和生長因素。根據微生物的種類和實驗目的不同，培養基也有多種不一樣的種類和配制方法。蛋白胨培養基是一種應用廣泛和普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。由于這種培養基中含有一般細胞生長繁殖所需要的基本的營養物質，所以可供微生物生長繁殖之用。干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。

三、器材與試劑

      1.器材 ：試管、玻璃棒、培養基、牛角匙、分裝器、三角瓶、燒杯、量筒、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、鑷子、麻繩、棉花、牛皮紙、記號筆、紗布、培養皿、干熱滅菌箱、注射器、吸管、微孔濾膜過濾器等。
      2.試劑 蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實驗步驟
      1.稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查

      2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

      3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查

      4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項

     1.要嚴格按配方配制。

     2.調pH不要過頭。

     3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，60ºC以下放物、取物。

     4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后先排除冷空氣，降壓回零后取物。

     5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。