細(xì)胞傳代培養(yǎng)實驗

       體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細(xì)胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境，培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度（37°C）、穩(wěn)定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對飽和濕度（95%），來對細(xì)胞/組織進(jìn)行體外培養(yǎng)的一種裝置，是細(xì)胞、組織、細(xì)菌培養(yǎng)的一種先進(jìn)儀器，是開展免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備。

      培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細(xì)胞分散，從容器中取出，以１:２或１:３以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)；細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。

      在一代中，細(xì)胞培增３～６次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/１００個細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于０.２％～０.５％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)３～５％；細(xì)胞接種２～３天分裂增殖旺盛，是活力Zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進(jìn)行各種試驗。

      實驗步驟：

     １.將長成的培養(yǎng)細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)液，加入少許消化液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜)，靜置５～１０分鐘。

     ２.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞，如果細(xì)胞變圓，相互之間不再連接成片，這時應(yīng)立即在超凈臺中將消化液倒掉，加入３～５ml新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細(xì)胞懸液。

     ３.將細(xì)胞懸液吸出２ml左右，加到另一個培養(yǎng)瓶中并向每個瓶中分別加３ml左右培養(yǎng)液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養(yǎng)箱中，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。一般情況，傳代后的細(xì)胞在２小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，２～４天就可在瓶內(nèi)形成單層，需要再次進(jìn)行傳代。

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