普通培養(yǎng)箱改為CO2培養(yǎng)箱及在雜交瘤中的應(yīng)用

       材料與方法

       將三角形橡膠密封條和醫(yī)用乳膠管用市售強(qiáng)力膠封閉內(nèi)箱接縫處及玻璃內(nèi)門：除去箱頂溫度計(jì)，箱內(nèi)掛入干濕溫度計(jì)(可在玻璃內(nèi)門處觀察溫、濕度)：原溫度計(jì)孔以橡膠塞密封后打孔安裝二氧化碳培養(yǎng)箱入氣管和排氣管，連接CO2鋼瓶與CO2入氣管，排氣管用鐵夾夾閉；

       普通氧氣流量表控制CO2流量，濕化瓶?jī)?nèi)盛10硫酸銅水溶液(可抑制霉菌生長(zhǎng))；內(nèi)箱底層置一方盤盛水(可保持箱內(nèi)相對(duì)濕度在70以上)。測(cè)量?jī)?nèi)箱長(zhǎng)、寬、高，計(jì)算容積為600m3,開放排氣管，調(diào)節(jié)CO2流量在10升：分，持續(xù)3分鐘，進(jìn)氣30升。此時(shí)箱內(nèi)CO2理論含量應(yīng)為50,夾閉排氣管。

       我們用CO2檢測(cè)管測(cè)得CO2實(shí)際含量為5±0.20.24小時(shí)后CO2含量下降約0.50,左右，可用CO2持續(xù)微量補(bǔ)充(以20個(gè)氣泡分計(jì))來(lái)衡定控制溫度在370.5℃

       使用注意

       1.環(huán)境盡量保持清潔二氧化碳培養(yǎng)箱定期熏蒸消毒，及時(shí)更換濕化瓶?jī)?nèi)的硫酸銅溶液，以防止霉菌生長(zhǎng)和支原體污染。

       2.平時(shí)短、頻繁地開啟可不必補(bǔ)充CO2,使用完畢后按要求及時(shí)重新調(diào)整CO2含量。

       3.由于該二氧化碳培養(yǎng)箱外門無(wú)電熱裝置，導(dǎo)致玻璃門內(nèi)外溫差而出現(xiàn)的冷凝水，一般無(wú)不良影響。有條件者可在外門夾層加電熱絲解決。

       4.因箱內(nèi)無(wú)氣體循環(huán)系統(tǒng)，CO2與空氣混勻度未必一致，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明并無(wú)影響。
討論我們應(yīng)用該二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行載脂蛋白B100單克隆抗體(apo100cab)雜交瘤細(xì)胞系的建株實(shí)驗(yàn)，獲得成功。培養(yǎng)的小鼠SP20-Ag14骨髓瘤細(xì)胞系及小鼠脾細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞等均生長(zhǎng)良好，平均融合率為666克隆化培養(yǎng)后所獲的3株apoB0 ) McAb雜交瘤細(xì)胞系誘生的腹水中McAb效價(jià)均為1:3200( ELISA)：細(xì)胞株經(jīng)液氮保存、傳代與凍融一年多，仍能持續(xù)穩(wěn)定地分泌高滴度的McAb實(shí)踐證明，這一裝置性能穩(wěn)定，使用方便，經(jīng)濟(jì)可靠，并可根據(jù)需要調(diào)整CO依度，可*替代昂貴的自動(dòng)CO2孵箱，對(duì)普通實(shí)驗(yàn)室及基層單位進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和制備單充隆抗體具有廣泛的推廣價(jià)值。

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