使用霉菌培養箱完成對SD大鼠熱應激模型的制作

中國南方普遍發生的高溫又使這一疾病受到更多重動物模型是研究疾病的有力工具，國內針對大鼠熱應激模型的制作方法和程序的報道很少，而以其為檢測工具的報道很多，而且控制條件和方法不盡相同，冷雪等選用180~200g雄性Wistar大鼠，溫度38℃，相對濕度80%，熱攻擊1h，最終以肛溫、心電圖等評價；高峰等“選用SD大鼠，溫度44℃，熱攻擊2h，最后檢測血清GSH-Px、MDA、IL-2等活性或含量鑒定：陳琦等亦選用SD大鼠，溫度41℃，相對濕度60%，熱攻擊2h，最后根據行為變化和肝臟Hsp70表達量鑒定。

以上報道的大鼠熱應激模型制作手段和評價方法差異較大，娜琴等認為應激動物模型尚無統一標準，建議評價指標為行為學變化和實驗室相關檢測指標，并認為Hsp70變化是主因。本研究模擬熱應激自然發生的因素，結合前人經驗以及大鼠自身的生理特點，試圖建立比較合理的大鼠熱應激模型，以行為變化、剖檢變化、血清酶活性、抗氧化指標和肝臟Hsp70表達量為標準進行驗證，本期為大鼠熱應激模型標準化建立、體溫調究、節相研關熱性病的預防和治療提供參考。

材料與方法

材料

實驗動物SD大鼠20只，雄性，清潔級，體(205g*60)g，2009-0004J，按照國家實驗動物環境標準(GB14925-2010)◎養。.L.1.2試及設備Na離子試盒、K*離子試劑盒、白白試劑盒、總蛋白試制盒，堿性磷酸試制盒、谷丙轉氨試劑盒、肌酸請酸肌試劑盒、乳脫氫試劑盒、谷草轉氨酶試劑盒、再二試劑盒、超氧化物線化酶測試盤。霉菌培養箱。pH530型pH測定儀

方法

精智分組及模型復制SD大鼠隨機分為兩組，組為一對照組，二組為模型組。一組在22℃屏障系境統內正常飼環養，二組參考部分文獻*氣*，模，置霉菌培養箱內升溫飼養，溫度為40℃，濕度為50%，2h后自霉菌培養箱取出，行為評價后眼底靜脈叢采血，分離血清后檢測相關指標。

生理生化指標測定血清[K]、血清[Na]、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血紅蛋白(HB)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸磷酸肌酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的測定，均按試劑盒說明書進行。

肝臟HSP70表達量測定用裂解液處理2.0g肝臟組織塊，常規方法提取總蛋白，BCA法測蛋白濃度，用10%的SDS-PAGE以70V/120V恒定電壓電泳，電泳結束轉至PVDF膜，TBST37℃封閉1h，先后加入HSP70兔抗鼠多克隆抗體和GAPDH鼠抗單克隆抗體，4℃孵育12h；HSP70經過TBST洗滌后加入HRP標記的山羊抗兔IgG，37℃孵育1h，TBST再次洗滌，ECL化學發光試劑顯影檢測：GAPDH4℃孵育后直接以ECL化學發光試劑顯影檢測。HSP70相對含量以HSP70/GAPDH灰度比值表示。