免疫磁珠集菌方法

免疫磁珠集菌方法(IMS):
原理:用包被有O157:H7單克隆抗體的磁珠進(jìn)行免疫磁性的分離方法。對待檢標(biāo)本先進(jìn)行增菌，然后再和抗O157：H7的磁珠共同孵育，zui后將磁珠-細(xì)菌混合物懸浮后涂于CT-SMAC平板或科瑪嘉O157:H7顯色平板進(jìn)行分離培養(yǎng)。

操作步驟：
1、 取下磁板，將編號的1.5ml的Eppendorf離心管，置入Dynal     MPC-M架上。

2、 輕柔混勻抗 E.coilO157免疫磁珠 （反復(fù)顛倒，直到管底沉淀*消失），吸取抗E.coilO157免疫磁珠，置入每只編號的Eppendorf離心管20ul。

3、 取金標(biāo)檢測陽性的樣品增菌培養(yǎng)物1ml，加入上述對應(yīng)的Eppendorf離心管中。蓋緊蓋子。輕輕顛倒混勻。

4、置于Dynal  MX3旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上，室溫下，旋轉(zhuǎn)30分鐘（如果沒有旋轉(zhuǎn)器，可人工旋轉(zhuǎn)）。

5、將磁鐵板插入Dynal  MPC-M架中，反復(fù)顛倒數(shù)次，將抗E.coilO157免疫磁珠吸附沉淀在Eppendorf離心管上。吸去上清（包括殘留在管蓋上的液體），并棄掉。

6、將磁鐵板從Dynal  MPC-M架抽出。每只Eppendorf離心管中加入1mlPBS-Tween20(pH7.4),輕輕顛倒混勻，重新懸浮免疫磁珠。

7、重復(fù)5-6步驟。

8、重復(fù)5步驟。

9、用80-100 ul PBS-Tween20(pH7.4) 重新懸浮免疫磁珠細(xì)菌混合物。
PBS-Tween20(pH7.4)配方：
KH2PO4              0.2g
NaH2PO4 · 12H2O      2.9g
NaCL                 8.0g
KCL                  0.2g
Tween-20              0.5ml
加水至1000ml